實驗室生物安全柜的等級區(qū)分及使用注意事項

二零零三年的非典給我國的政治、經(jīng)濟、外交及人們的日常生活帶來了巨大的沖擊，在這場戰(zhàn)役中，檢驗工作者不顧個人的安危，積投入到抗擊非典的戰(zhàn)斗中，為取得那場戰(zhàn)役的勝利做出了不可磨滅的貢獻。同時非典也留給我們很多啟示，居安思危，應(yīng)重視臨床實驗室所面臨的生物安全問題，加強實驗室的安全管理勢在必行。同年四月二十五日，WHO專門頒布了《WHO關(guān)于處理SARS標本的生物安全指南》，對血和尿標本病毒及細胞培養(yǎng)和動物實驗做了嚴格的規(guī)定，今年國家衛(wèi)生部高強部長簽發(fā)了五十號令，對病原微生物實驗室的安全問題做了明確的法規(guī)要求，相繼出臺了一系列的“臨床實驗室安全準則"等文件，并要求各級CDC落實“醫(yī)學實驗室安全管理"即ISO15190文件。這對保護工作人員、環(huán)境以及保護樣本和落實生物安全管理起到了至關(guān)重要的作用。下面就將生物安全柜、功能及選型和使用注意事項作以說明：

1、生物安全柜的分級及功能

生物安全柜分為Ⅰ級（BSL-1）、Ⅱ級（BSL-2）和Ⅲ級（BSL-3）生物安全柜；BSL-2級生物安全柜又分為A型、B型、B2型、B3型。

生物安全柜其功能如下：BSL-1級生物安全柜可人員和環(huán)境的保護，但不對樣本的保護，常被用作特殊的密封設(shè)備（如離心），或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程。BSL-2級生物安全柜可人員、環(huán)境和樣本的保護，其中B2型為全排風式生物安全柜，沒有空氣在安全柜內(nèi)循環(huán)，可同時基本的生物和化學防護。BSL-3級生物安全柜可人員、環(huán)境和樣本的保護，用于操作四級生物安全水平的微生物或病原體。

2、生物安全柜的正確選型

實驗室選擇生物安全柜時應(yīng)詳細了解從事傳染性微生物工作中的生物安全所包括的主要要素，根據(jù)給個人、環(huán)境、社會的保護情況選取不同的生物安全柜。

2.1生物安全（BSL-1）：適合用于非常熟悉的病源，該病源不會經(jīng)常引發(fā)健康成人疾病，對實驗人員和環(huán)境潛在危險小，實驗室沒有必要和建筑物中的一般行走區(qū)分開，一般按照標準的分級生物操作在開放的實驗室臺面上開展工作。不要求一般也不使用特殊的抑制設(shè)備和設(shè)施（生物安全柜）。

2.2生物安全二級（BSL-2）：適合于對人和環(huán)境有中度潛在危險的病源。與BSL-1的區(qū)別在于：①實驗人員均應(yīng)接受過病源處理方面的特殊培訓，并由有資格的工作者指導(dǎo)。②進行實驗時限制進入實驗室。③對于污染的銳器應(yīng)特別注意。④某些可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠或飛濺物的過程應(yīng)在生物安全柜中或其他物力抑制設(shè)備中進行，可選用Ⅰ、Ⅱ級生物安全柜。

2.3生物安全三級（BSL-3）：應(yīng)用于臨床、診斷、教學、或者生產(chǎn)設(shè)施，在該中開展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病原的工作。若因暴露而吸入該病原會引發(fā)嚴重的可能致死的疾病。實驗人員應(yīng)在處理致病性的可能使人致死的病原方面受過訓練，并由對該病原工作有經(jīng)驗的有資格的科學工作者監(jiān)督。所有與傳染源操作有關(guān)的步驟都在生物安全柜或其他物理抑制裝置中進行，選用二級或二級以上生物安全柜，實驗室需要特殊設(shè)計和施工，室內(nèi)為負壓。

2.4生物安全四級（BSL-4）應(yīng)用于對生命有高度危險的危險性病原或外源性病原?？赏ㄟ^氣溶膠而致實驗室感染或未知傳染風險，且引起致命的有關(guān)病原，應(yīng)選用三級生物安全柜及正壓防護服，如SARS病毒對人或環(huán)境具有中度潛在危險，對攜帶該病毒的患者樣本處理均應(yīng)在生物安全二級（BSL-2）或二級以上實驗室中進行，為了對操作人員和環(huán)境及樣品均有效的保護，實驗室應(yīng)選用二級以上或全排風式生物安全柜（B2型）。

3、生物安全柜使用中應(yīng)注意的問題

3.1對人員的管理

3.1.1 只有經(jīng)過培訓和指導(dǎo)的實驗室工作人員才能操作該設(shè)備，未經(jīng)培訓人員一律不能使用。

3.1.2 禁止非工作人員進入實驗室，禁止工作人員在操作設(shè)備時吸煙以及處理隱性眼鏡等。

3.1.3 工作人員操作完成后應(yīng)如實填寫《使用記錄》。

3.2 對設(shè)備的管理

3.2.1 對生物安全柜采用單獨供電，以免其他設(shè)備發(fā)生意外導(dǎo)致生物安全柜失效。

3.2.2 設(shè)備頂部通風口不能被任何東西覆蓋以保證排氣通暢。

3.2.3設(shè)備出現(xiàn)報警時應(yīng)停止使用，查明原因確保安全后再使用。如出現(xiàn)系統(tǒng)失效的訊號時，因空氣不能被有效的過濾而不能繼續(xù)使用該設(shè)備進行操作。

3.2.4更換空氣過濾器時應(yīng)與工程師lianxi，并進行更換，實驗室工作人員不能私自進行更換，以免操作不當造成對周圍人員和環(huán)境的污染。

3.2.5 用過的過濾器必須放在密閉的容器中，并在明確的位置注明其可能含有危險的微生物，引起注意并進行特殊處理。

3.2.6新購置的生物安全柜在使用之前或維護重新移位以后必須由技術(shù)人員對生物安全柜的整體性能進行認證，每臺生物安全柜應(yīng)該至少每年進行一次測試和認證，以確保操作的安全。

3.2.7生物安全柜性能測試應(yīng)包括：送風氣流的速度和送風量的測試，處進風速度測試，氣流煙霧流型試驗，空氣過濾器滲透試驗，安全柜泄露試驗，電器漏電和接地電阻及性試驗，光照強度試驗，振動試驗，噪音水平試驗，紫外線燈測試等。

3.3 工作前的準備

3.3.1 在開始工作前要讓生物安全柜封機至少運行3-5分鐘，使安全柜內(nèi)的空氣進行凈化。

3.3.2 安全柜的工作臺面、內(nèi)壁和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭，再用無菌蒸餾水進行擦拭，以清除殘余的消毒劑。

3.3.3 放到生物安全柜內(nèi)的容器和材料的表面應(yīng)以75%的酒精擦拭，以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi)。

4、操作中的注意事項

4.1 操作人員必須做好個人防護后才能進行生物安全柜的操作。

4.2操作者先把手臂放入生物安全柜內(nèi)大約一分鐘，才能進行實驗操作，這樣可以使安全柜穩(wěn)定并且能讓氣流清掃掉手臂表面的微生物污染。

4.3 所有的操作應(yīng)該在距離前面的格柵四英寸里面的工作臺面上進行，前面的格柵不能被任何物品阻擋。

4.4所有的材料應(yīng)該放在距離安全柜前面的格柵和后面工作臺面邊緣盡可能遠的位置，容易產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（如攪拌器、離心機等），應(yīng)該靠近安全柜的后部放置。

4.5 操作時的動作應(yīng)該從工作臺面的清潔區(qū)到污染區(qū)，一般是從左側(cè)到右側(cè)（習慣于左手操作的人員相反）。

4.6在生物安全柜內(nèi)如發(fā)生少量的噴灑時，應(yīng)用污染清除吸收紙巾立即進行處理，并將使用過的紙巾放到生物危害包里，再用浸泡消毒液的毛巾立即進行擦拭消毒，如發(fā)生大量的溢出時，要求廣泛的消毒，安全柜內(nèi)的所有物品應(yīng)該進行表面消毒，并拿出安全柜，使用消毒液的作用時間應(yīng)維持在20-30分鐘。

4.7 生物安全柜內(nèi)禁止使用酒精燈，使用酒精燈進行消毒接種工具容易發(fā)生危險，應(yīng)使用電子高溫滅菌設(shè)備。

4.8工作完成時所有容器和設(shè)備應(yīng)進行表面消毒并拿出安全柜，對安全柜的臺面、邊緣、后壁和觀察窗內(nèi)側(cè)進行擦拭、消毒。

4.9 工作人員離開實驗室應(yīng)摘下手套、脫下工作服并進行洗手。

總之：臨床實驗室（包括HIV實驗室）是一個對人類具有一定危險的工作場所，保護臨床實驗室的安全和人員健康是防止環(huán)境污染的di一步和要工作。生物安全包括生物安全設(shè)施、生物安全設(shè)備、良好的病原微生物學操作以及嚴格的管理，而實驗室生物安全設(shè)備的投入是其中*的一個環(huán)節(jié)，了解生物安全及其相關(guān)知識，正確選擇生物安全柜及明確操作中的注意事項對于實驗室做好安全防護工作保護工作人員的安全和健康，具有重要意義。